Variabilidad genética en cepas de Sporothrix schenckii aisladas en Abancay, Perú / Genetic variability in Sporothrix schenckii strains isolated in Abancay, Peru

Objetivo: Identificar los genotipos de S. schenckii que circulan en 2 distritos de la provincia de Abancay, Perú. Material y Métodos: Se evaluaron 17 cepas procedentes de pacientes con lesiones linfocutáneas y lesión cutánea fija mediante la técnica del ADN Polimorfo Amplificado Aleatorio - Reacción en Cadena de la Polimerasa (RAPD - PCR) con el cebador GTG 5 (GTG GTG GTG GTG GTG). Resultados: Identificamos 6 genotipos, siendo el genotipo I el predominante en las áreas de estudio. No se logró asociar los genotipos obtenidos con caracteres clínicos y geográficos. Conclusiones: Nuestros resultados evidencian que existe biodiversidad genética entre las cepas de S. schenckii que circulan en ambas zonas.

Objective: To identify S. schenckii genotypes circulating in 2 districts from the Abancay province in Peru. Material and Methods: 17 strains from patients with lymphocutaneous and fixed cutaneous lesions using RAPD-PCR techniques (Randomized Amplified Polymorphic DNA-Polymerase Chain Reaction) with A GTG 5 primer (GTG GTG GTG GTG GTG). Results: We identified 6 genotypes, being genotype I the most frequent in the studied geographical areas. There was not any association with clinical and geographical characteristics. Conclusions: Our results prove that there is genetic biodiversity between circulating S. schenckii strains in the two districts assessed.

Evaluación serológica de una proteína recombinante a partir de una cepa aislada del virus de la fiebre amarilla en el Perú: un estudio piloto / Serologic assessment of a recombinant protein from an isolated strain of yellow fever virus in Peru: a pilot study

Objetivo: Evaluar serológicamente una proteína recombinante de 66 kDa (Er66) de una cepa del virus de la fiebre amarilla aislada en el Perú usando anticuerpos inmunoreactivos. Material y métodos: La proteína Er66 fue expresada in virtro en la bacteria Escherichia coli y enfrentada a títulos de 1/100, 1/50 y 1/25 de anticuerpos monoclonales, y a sueros con anticuerpos IgM e IgG inmunoreactivos contra el virus de la fiebre amarilla mediante ensayos de Western blot (WB). Asimismo, se evaluaron proteínas totales de las cepas de referencia del virus dengue (DEN) y fiebre amarilla como controles de antigenicidad. Resultados: La proteína recombinante Er66 presentó antifenicidad contra títulos de 1/50 y 1/25 de anticuerpo monoclonal (MAB8701); sin embargo, no se observó inmunoreactividad en suerpos positivos para fiebre amarilla y dengue. Los ensayos con extractos crudos de la cepa de fiebre amarilla Asibi 17D (PFTA) revelaron que la antigenicidad de las proteínas virales comprendidas entre 60 y 80 kDA fue afectada negativamente a temperaturas desnaturalizantes de 100grados centígrados. En cambio, tratamientos con ß-mercaptoetanol sin calor generó un aumento de la antigenicidad de dichas proteínas. Siguiendo este mismo principio, la proteína Er66 fue sometida a tratamientos desnaturalizantes con ß-mercaptoetanol sin incluir calor y fue enfrentada nuevamente a los sueros reactivos. El resultado final reveló que la proteína Er66 generó generó inmunoreactividad frente a sueros con altos títulos de anticuerpos IgM e IgG para fiebre amarilla mientras que en otras muestras se observó una débil señal. Conclusiones: Los datos obtenidos en este trabajo demuestran que la Er66 pudo ser reconocida por anticuerpos frente a sueros con altos tíulos de anticuerpos IgM e IgG específicos para fiebre amarilla presentes en sueros de pacientes infectados. Los datos presentados en este artículo sugieren el uso de proteínas recombinantes como posibles candidatas de valor diagnóstico para la FA

Caracterización molecular de Klebsiella pneumoniae y Enterobacter cloacae productoras de ß-lactamasas de espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados intensivos neonatal de Lima / Molecular characterization of extended-spectrum type SHV-5 ß-Lactamases producing Klebsiella pneumoniae and Enterobacter cloacae in a neonatal intensive care unit in Lima

Objetivo: Determinar los mecanismos implicados en la transmisión y resistencia antimicrobiana de aislamientos hospitalarios de Klebsiella pneumoniae y Enterobacter cloacae. Materiales y métodos: Se determinó la diversidad genética de 10 aislamientos bacterianos provenientes de pacientes hospitalizados y muestras ambientales procedentes de una unidad de cuidados intensivos de neonatos de un hospital de Lima utilizando el patrón de banda de ADN ribosomal y plasmídico. Posteriormente, se caracterizó la resistencia antimicrobiana y sus principales factores utilizando electroforesis de punto isoeléctrico, Southern Blotting y PCR. Finalmente se evaluó la capacidad de transferencia de la resistencia mediante ensayos de conjugación bacteriana. Resultados: Todos los aislamientos de K. pneumoniae y E. cloacae presentaron el mismo perfil plasmídico. Los aislamientos de E. cloacae presentaron un mismo patrón genético, por el contrario se encontraron cuatro genotipos distintos de K. pneumoniae altamente relacionados. Todos los aislamientos produjeron ßlactamasa de especto extendido Tipo SHV-5 transferible a otras especies. Conclusiones: El estudio sugiere que la diseminación de estas bacterias en los neonatos pudo haber sido favorecida por un inadecuado manejo asistencial, una defectuosa conservación de leche para el consumo neonatal y el indiscriminado uso de antibióticos, el cual generó una activa transmisión de genes responsables de la resistencia antimicrobiana

Caracterización e inmunoreactividad de la proteína acídica ribosomal P2ß de L. (V.) braziliensis / Characterization and immunoreactivity of Leishmania braziliensis P2ß acidic ribosomal protein

Introducción: El diagnóstico serológico de la Leishmaniasis usando proteínas totales presenta reacciones cruzadas. la caracterización de nuevos antígenos de Leishmania mejorará el uso de herramientas serológicas en el diagnóstico de esta enfermedad. Objetivo: Caracterizar un nuevo antígeno de Leishmania. Materiales y métodos: Se selecionó el bacteriófago T166-U19 de una biblioteca de cADN de L. (V.) Brasiliensis el cual es reactivo a mezclas de sueros de Leishmaniasis cutánea y mucocutánea. El cADN del clon T166-U19 fue subclonado en el plásmido pGEX, luego secuenciado y la proteína recombinante fue expresada.La reactividad de esta proteína reombnante se evaluó por ELISA. Resultados: El cADN del clon T166-U19 presentó un marco de lectura abierto de 318 pb que traduce una proteína de 105 animoácidos con 81,1 por ciento, 82,9 por ciento y 60,7 por ciento de identidad total con la proteína acídica ribosomal LiP de L. (L.) infantum, P2 de L.(L.) donovani, y P2 de T. cruzi, respectivamente. Además, la proteína recombinante presentó baja reactividad (50 por ciento) con sueros de pacientes con Leishmaniosis, mientras que presentó reactividad cruzada con sueros de pacientes chagásicos. Conclusiones: Se caracterizó por primera vez la proteína acídica ribosomal P2ß de L. (V.) brasiliensis, y presentando baja reactividad con sueros de pacientes con Leishmaniasis

Variabilidad genética de plasmodium falciparum en pacientes con malaria grave y malaria no complicada en Iquitos - Perú / Genetic viability of plasmodium falciparum in patients with severe malaria and with non-complicated malaria in Iquitos-Peru

Objetivo: Determinar la diversidad genética del gen que codifica la proteína rica en glutamato (GLURP) de Plasmodium falciparum en pacientes con malaria complicada y no complicada circulante en un área del departamento de Loreto, distrito de Maynas. Materiales y métodos: La diversidad genética fue analizada usando reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en 30 muestras sanguíneas de pacientes con malaria no complicada (MNC) y 46 con malaria grave complicada (MGC). Resultados: Ocho genotipos fueron detectados en pacientes con MNC (Genotipo I, II, III, IV, V, VI, VII y VIII y cuatro genotipos en los pacientes con MGC (Genotipo V, VI, VII, VIII). Asimismo, en 50 por ciento de las muestras con MNC fueron detectadas infecciones múltiples, a diferencia de las muestras de MGC en donde no se detectó infecciones múltiples. Conclusión: Existe una diversidad genética en esta región del gen GLURP de P. falciparum, para esa época (marzo 1998 - abril 1999) y esa área del país. En tal sentido, nuestros resultados podrían servir de base para llevar a cabo estudios epidemiológicos posteriores, ya que permitiría conocer la distribución de las cepas circulantes en nuestro país.

Análisis genético del virus peruano de la fiebre amarilla / Genetic analysis of the peruvian yellow fever virus

Objetivo: Determinar las variantes genÚticas de aislamientos del virus peruano de la Fiebre Amarilla (FA). Materiales y mÚtodos: La región carboxiterminal del gen de la envoltura (E) de cinco aislamientos de FA obtenidas de pacientes provenientes de Ayacucho 1978 (PER1), JunÝn 1995 (PER2), Cerro de Pasco (PER3), Cusco (1998) y San MartÝn (1999) fue amplificada por PCR, secuenciada y analizada con programas software de ADN. Resultados: El Ýndice de similaridad de la secuencia de aminoßcidos presentó valores entre 97,6 por ciento y 99,7 por ciento de similiridad. El anßlisis filogenÚtico demostró una distancia genÚtica entre 0,40 y 6,50 mediante la secuencia de nucleótidos y, a travÚs de la secuencia de animoßcidos se observó un rango de 0,30 y 4,29. Sin embargo, las secuencias correspondientes a los sitios de glicosilación y a los apitopes de reconocimiento humoral fueron conservadas entre los cinco aislamientos, con excepción de algunos aislamientos de referencia reportados por otros autores. Conclusiones: Los virus de FA peruanos forman un grupo filogenéico distintoa otros virus de FA sudamericanos, basados en el anáisis genéico del gen E.

Síntesis in vitro de la proteína de la envoltura del virus peruano de la fiebre amarilla / In vitro synthesis of the envelope protein of the peruvian yellow fever virus

Objetivo: Sintetizar la proteína recombinante de la envoltura (Er) del virus peruano de la Fiebre Amarilla (FA) utilizando técnicas moleculares. Materiales y métodos: El gen de la proteína de interés fue amplificado por transcripción reversa - reacción en cadena e la polimerasa (RT-PCR) y clonado en un vector plasmídico para ser analizado mediante secuenciamiento de ADN. El inserto de ADN fue subclonado en un vector de expresión para ser traducido a proteína. Se purificó la proteína mediante cromatografía de afinidad bajo condiciones denaturantes, siendo visualizada por electroforésis en SDS-PAGE.Resultados: Se sintetizó y purificó la pr E del virus de la FA. Presentó un peso de && kDa, y luego de tres horas de inducción a partir de 1x10 células (OD=0,5) se obtuvo 10mg/mL de la proteína a miniescala. Conclusión: El análisis de la secuencia de aminoácidos demostró que Er podría ser un buen candidato a ser evaluado serológicamente y luego usado como herramienta de diagnóstico específico para la FA

Tipificación molecular del Vibrio cholerae 01 en el Perú / Molecular typification of Vibrio cholerae 01 from Peru

Este estudio de ribotipificación en 75 cepas de Vibrio cholerae 01 permitió identificar tres variantes ribotípicas, referidas como Per1, Per2 y Per3, aisladas durante el periodo 1991-1999 en el Perú. La variante Per1 fue reportada tanto en la etapa epidémica y endémica del cólera, mientras que Per2 y Per3 se relacionan sólo con la etapa endémica. Los resultados mostraron además una aparición constante y mayoritaria de la variante Per1, poniendo en evidencia la emergencia de un mismo grupo clonal en los brotes epidémicos del Perú. Las variantes ribotípicas encontradas fueron comparadas con los ribotipos de diferentes cepas referenciales de V. cholerae previamente caracterizadas. Se observó una identidad total del ribotipo Per1 con la variante ribotípica de aislamientos Asiáticos (Tailandia), encontrándose además altos índices de similitud entre los ribotipos Per1, Per2 y Per3, y evidenciándose una estrecha relación entre las cepas peuansa y los aislamientos asiáticos